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离心机在血型选取上的应用
发布时间:2017-07-20   点击次数:886次

输血时如血型不合会造成患者出现输血的不良反应,因此使用相符的血型是输血安全的前提保证。而作为人类的重要遗传标志-血型,在近年科学的发展下,人们逐步探索分析,已发现300余种现人类红细胞血型抗原。当今,世界多国正努力建立稀有血型细胞血库,当中对所发现的稀有血型,如Rh、MNSs、P、Kell、Kidd、Lutheran等,建立起稀有血型系统,以保证为稀有血型的患者更加快速及时地提供合适红细胞。

 

中国稀有血型筛选与建库

在我们的临床研究中,对于稀有血型的筛选工作和具体项目中,对于引发临床不良输血反应的稀有血型抗原或是表型组合是zui值得关注的,而事实证明这些稀有抗原或是表型组合往往存在于如Vel、Lan、Jk(a-b-)、Lu(a-b-)、Rhnull、OH等这些高频率血型抗原组以及多个血型系统中,与此同时我们也对如Fy(a-b+)、Di(a+b-)等能引起输血反应和新生儿溶血病的血型抗原的中国人特有的免疫反应而进行的筛选,并希望建立起符合我国国情的稀有血型库。以此来解决我国临床上的稀有血型不足、不良输血反应的发生等问题来提高我国的输血疗效。
 

尿素溶血试验

Jk(a-b-)表型的筛选:因稀有血型本身所具有特殊性,充分利用其特点设计出将其筛选出的方法,Kidd血型系统中Jk(a-b-),此种红细胞可在2M的尿素溶液中使其红细胞膜在6h以上的时间内保持完整性。而Jka和Jkb抗原的红细胞在2M尿素溶液中完全溶血的时间不超过30s。其操作过程为:选取RSP加样器设备将标本红细胞稀释到1%的悬液中,并在96孔微量板上加20ul悬液,再将100ul2mol/L尿素溶液加入其中,放置离心机中以800r/min转速离心3min,溶血为阳性,不溶血为阴性,如为阴性者则进一步对血细胞做分子生物学分析。本次通过Jk(a-b-)尿素筛选实验,获得8名Jk(a-b-)表型献血者。

试管法

将选取标本红细胞稀释为2-5%悬液,标记试管(抗-Mur、-Lub、-Rhmull、-Kell、-MN、-H)并加入相应抗血清和标本红细胞各50ul。采用直接离心法或间接抗球蛋白法,轻摇观察结果;发生凝集为阳性,反之为阴性,共发现稀·临床研究·有血型7例。

在我们对稀有血型筛选过程中,有4种稀有血型是采用筛选稀有等位基因的方法。通过采用PCR的定点诱变技术,我们成功构建出含有突变SNP位点的s和Oka血型等位基因的标准质粒,制备出稀有血型等位基因突变点片段,应用在对照分子生物学方法筛选稀有血型。组建多个多重PCR体系,检测等位基因。

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