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如何使用反向移液技术更的移取蛋白溶液
发布时间:2011-10-12   点击次数:807次

每支移液器的液程通常都用纯水和正向移液技术校准过。因此我们推荐使用正向移液技术移取水性溶液,如缓冲液,稀释酸或碱。当移取不同于水的液体时,由于具有不同的液体特性,其移液量可能偏离所选的量

1.将按钮压至第二停点。

2.将吸头浸入液面1cm处,缓慢释放按钮使其滑回原位。这将时液体充满吸头。将吸头从液体中取出,接触容器边缘去掉多余液体。

3.放液到接收容器时平稳地轻按按钮至*停点。保持在这个位置。一些液体会残留在吸头中不能被放出。

4.残留在吸头内的液体能够被吹回原溶剂中或者同吸头一起丢弃。

5.松开按钮到准备位置。

    选择合适的移液器对于微量移液的性也很重要,Thermo Scientific F系列移液器的超强吹出设计则满足了微量移液对性的需求。低于50μl液程的Thermo F系列移液器均采用双活塞设计,与其它普通移液器相比,其空气吹出能力增大50%-60%,因此在小体积的液体吹出时会非常干净完全,大大提高了移液的性。

    我们使用Thermo Scientific Finnpipette F2 1-10 μl移液器,配合Thermo Scientific Finntip Flex 10吸头,同时分别使用正向移液和反向移液,移取1%牛血清白蛋白(BSA,Sigma A7030)进行移液性测试。

图1 表明当使用反向移液技术时,移液量的变化比使用正向移液技术处于更狭窄的一个范围。

图2 表明使用两种移液方式的不度。不度是估量移液的重复性的。反向移液技术可以使不度相对于正向移液技术降低50%。

    这是因为,BSA溶液含有易被疏水移液器吸头壁吸附的疏水成分。当使用正向移液技术时,每次移液后少量的液体易残留在吸头中。这种趋势会增加吹出液体体积之间的偏差,因为当重复移液时吸头中累积的残余液体可能增加下一次移液的移液量。而反向移液技术中有额外的液体被吸入吸头中,这些额外的液体作用似一个蓄水池它使连续移液的移液量均等。这个蓄水池也能阻止空气在吹出液体的zui后从吸头口进入,这样可以降低液体起泡的可能性。这使反向移液技术在移取小液量液体时尤其有用。由此可见,选择Thermo Scientific F2移液器,同时配合反向移液技术,可较好的提高移取蛋白溶液的度和重复性。

来源:离心机

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