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谈分离胶对血清中HBV DNA测定结果的影响
发布时间:2015-03-16   点击次数:1713次

当前分析
分离胶促凝剂真空负压采血管不仅填充有进口分离胶,而且在采血管内壁上均匀涂布有促凝剂,因此可大大缩短血液凝固时间。进口分离胶对血清中的蛋白的吸附能力低,稳定性强,离心后的分离胶固化形成屏障,平整地将血清与血细胞完全分离,能够有效阻止血清和血细胞间的物质交换,从而有利于获得高质量的血清,使血液检测的结果更加真实,也有利于提高血清的收集率。目前分离胶促凝剂真空负压采血管主要用于以血清标本为检测对象的临床生化检验、免疫学检验等。但对分离胶促凝剂真空负压采血管与普通第二代促凝剂采血管所采集全血标本,并在分离血清后以血清作为检测对象进行 乙 型 肝 炎 病 毒DNA 荧光定量聚合酶链反应测定结果差异的相关研究较少。为了探讨分离胶对血清中HBV DNA测定结果的影响,笔者进行了相关对比试验和分析,结果报道如下。

资料与方法
随机选取90例本院住院和门诊乙型肝炎乙肝患者其中男52例女38例平均年龄(45岁)每例患者采用2种采血管进行全血标本采集,患者在接受1次静脉穿刺后分别用2种采血管采集全血标本,其中分离胶促凝剂真空负压采血管为试验组,未添加分离胶的普通第二代促凝剂真空负压采血管为对照组各采集3mL静脉血标本。

耗材:
采用统一的不同类型一次性人体静脉血采集管

方法:
90例患者分别用分离胶促凝剂真空负压采血管和促凝剂真空负压采血管,同时各无菌采集空腹静脉血,3mL分离胶促凝剂真空负压采血管采血后立即180度轻轻颠倒混匀5-6次室温放置20分钟后,8cm为离心半径3500r/min离心10min。将以上各组来源的血清标本分别按HVB检测试剂盒说明书进行HBV DNA定量扩增检测。所测结果用拷贝数的对数值表示。(2)HBV DNA提取和扩增: 直接吸取血清:100L,加等量的DNA浓缩液充分混匀,5cm为离心半径12000r/min离心10min,弃上清液,加20LDNA提取液充分混匀,100度金属浴10min前后误差不超过1min,静置6-8h以5cm为离心半径10000r/min离心5min,取上清液5l做PCR反应。将点好样的反应管放入PCR仪上,93度2min预变性,然后按10个循环。每批PCR试验均同时检测阴阳性对照标本和临界阳性标本。
统计学处理!采用SPSS13.0统计软件对试验数据进行配对统计学处理;采用配对t检验进行检测结果比较,p<0.05时比较差异有统计学意义.

结果

分离胶促凝剂真空负压采血管与普通第二代促凝剂真空负压采血管分离血清进行检测结果见表。讨论

随着分子生物学的发展,乙肝患者的血清学检测已经从以常规的“两对半"检测间接反映患者体内病毒是否复制,开始转向血清学的HBV DNA检测。乙肝对人类危害性极大,病毒的活跃复制则是启动或激发肝脏组织炎性反应的因素,因此从HBV DNA定量的角度检测对临床诊断和评价病毒复制水平有十分重要的意义。目前临床上绝大多数都是以分离自用普通第二代促凝剂真空负压采血管所采集的全血标本的血清进行HBV DNA检测,所以本研究选择该种采血管作为对照组。FQ-PCR技术是在常规PCR基础上添加了荧光标记探针,在无特异性PCR发生时,荧光信号不改变;当有特异性PCR扩增时,荧光信号增强。在FQ-PCR检测过程中,实时检测反应体系中荧光信号的变化,参照阳性梯度标准品,由电脑自动计算出样品起始DNA定量结果。由于分离胶技术不断得到推广,分离胶促凝剂真空负压采血管在临床检验医学工作中得到广泛应用。但分离胶促凝剂真空负压采血管分离血清后对HBV DNA检测结果的影响相关报道很少。本研究结果显示,使用分离胶促凝剂真空负压采血管的90例乙肝患者血清HBV DNA的检测结果对数值为,4.92+-0.19使用普通促凝剂真空负压采血管时乙肝患者血清HBV DNA的检测结果对数值为;经配对检验分析比较,两者间的差异无统计学意义p0.05。因此使用分离胶促凝剂真空负压采血管不会对HBV DNA检测产生影响,而分离胶促凝剂真空负压采血管有利于更快速地分离血清进行HBV DNA检测,能大大提高工作效率,值得在临床PCR扩增实验室中广泛


 

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