一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法，按这一方法zui终得到的病毒量约为3×1011～3×1012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000～10000，因此1L 培养细胞可得到约5×1012 病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化，则必须至少3×108 的细胞，这样才能正确分辨出病毒带。对于蛋白表达，则根据需要可在任何一步扩增步骤中停止，离心沉淀细胞后按照适当的操作方法进行蛋白抽提（根据蛋白类型的不同抽提上清或细胞沉淀）。为优化时间进程，每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同步。如果由于各种原因不能同步，则必须将病毒冻存，直至下一次细胞培养开始后再融化病毒。注意每次扩增都将会剩下一些病毒，这些病毒先不必丢弃，以便下一步扩增失败时备用。每次扩增都用zui低代的病毒颗粒，这样产生突变型病毒的可能性会大大降低。
| *代 | 第二代 | 第三代 | 第四代 | |
| 每瓶细胞数 | 1×105 | 5×106 | 1×107 | 1×107 |
| 培养瓶大小（cm2） | | 75 | 175 | 175 |
| 培养瓶数 | 24 孔板1 孔 | 1 | 3 | 30 |
| | | 扩增后的病 | | |
| 感染来源 | 稀释的空斑 | | 第二代病毒 | 第三代病毒 |
| | | 毒保存液 | | |
| | | 0.5 mL 或 | | |
| 每瓶接种量 | 0.1 mL | | 1 mL | 1.5 mL |
| | | 2.5×107 | | |
| 总培养体积 | 1 mL | 10 mL | 90 mL | 900 mL |
| MOI | 0.01 | 5 | 25 | 25 |
| 滴度（VP/mL） | 1×108～9 | 5×108～9 | 3.3×108～9 | 3.3×108～9 |
| 总病毒量 | 1×108～9 | 5×109～10 | 3×1010～11 | 3×1011～12 |
来源：低速离心机
